植物Elisa試劑盒需要遵循這幾個細節(jié)

更新時間：2019-09-24

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　　植物Elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被植物活性氧（ROS）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物活性氧（ROS）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

　　植物Elisa試劑盒需要遵循這幾個細節(jié)：抗原或抗體能吸附于固相載體外表，并堅持其免疫學(xué)活性，抗原或抗體可通過共價鍵與酶銜接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能堅持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)參加底物的色彩反響來斷定是否有免疫反響的存在，并且色彩反響的深淺是與標本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺制作規(guī)范曲線并依此計算出不知道樣品中抗體或抗原的濃度。

　　樣品的濃度等指標是根據(jù)標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結(jié)果無從談起。

　　植物Elisa試劑盒采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。設(shè)置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。

　　標準曲線的樣品數(shù)一般為7個點，但至少要保證有5個點。檢測標準樣品時，應(yīng)按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。做出的標準曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎樱话銇碚f，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。

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